食品中滴滴涕、六六六的殘留量的測定

1　原理
　　樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)提取、凈化后用氣相色譜法測定，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。
電子捕獲檢測器對于負(fù)電性強(qiáng)的化合物具有較高的靈敏度, 利用這一特點(diǎn), 可分別測出微量的六六六和滴滴涕。不同異構(gòu)體和代謝物可同時分別測定。
　　出峰順序：α-666、γ-666、β-666、δ-666、p,p'-DDE、o,p'-DDT、p,p'-DDD、p,p'-DDT。
2  試劑
使用的試劑一般系分析純, 有機(jī)溶劑需經(jīng)重蒸餾。
2.1 丙酮。
2.2 乙醚。
2.3 95%乙醇。
2.4 石油醚: 沸程30～60℃。
2.5 苯。
2.6 無水硫酸鈉。
2.7 草酸鉀。
2.8 硫酸。
2.9 2%硫酸鈉溶液。
2.10 過氯酸-冰乙酸混合液:1:1。
2.11 六六六、滴滴涕標(biāo)準(zhǔn)溶液:精密稱取甲、乙、丙、丁六六六四種異構(gòu)體和p,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴滴、p,p'滴滴伊、o,p'-滴滴涕(α、β、γ、δ-666、p,p'-DDT、p,p'-DDD、p,p'-DDE、o,p'-DDT)各10mg,溶于苯,分別移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混勻,每毫升含農(nóng)藥100μg,作為貯備液存于冰箱中。
2.12 六六六、滴滴涕標(biāo)準(zhǔn)使用液:臨用時各吸取2.0ml,分別移入10ml容量瓶中, 各加苯至刻度, 混勻。每毫升相當(dāng)農(nóng)藥20μg, 此濃度適用于薄層色譜法。用氣相色譜法時，根據(jù)儀器靈敏度還需以己烷稀釋至適宜濃度，一般為0.01μg/ml。
2.13 載體: 硅藻土, 80～100目, 氣相色譜用。
2.14 固定液:OV-17及QF-1。
3 儀器
滕海公司 GC-2001(ECD)
4　操作方法
4.1　提取
4.1.1 糧食：稱取20g粉碎后并通過20目篩的樣品，置于250ml具塞錐形瓶中，加100ml石油醚，于電動振蕩器上振蕩30min，濾入150ml分液漏斗中，以20～30ml石油醚分?jǐn)?shù)次洗滌殘渣，洗液并入分液漏斗中, 以石油醚稀釋至100ml。
4.1.2 蔬菜、水果: 稱取200g樣品，置于搗碎機(jī)中搗碎1～2min(若樣品含水分少，可加一定量的水)。稱取相當(dāng)于原樣50g的勻漿，加100ml丙酮,振蕩lmin, 浸泡1h，過濾。殘渣用丙酮洗滌三次,每次10ml，洗液并入濾液，置于500ml分液漏斗中，加80ml石油醚，振搖1min，加200ml2％硫酸鈉溶液，振搖1min，靜置分層,棄去下層。將上層石油醚液經(jīng)盛有約15g無水硫酸鈉的漏斗,濾入另一分液漏斗中，再以少量石油醚分?jǐn)?shù)次洗滌漏斗及其內(nèi)容物，洗液并入濾液中，并以石油醚稀釋至100ml。
4.1.3 動物油：稱取5g煉過的樣品，溶于250ml石油醚，移入500ml分液漏斗中。
4.1.4 植物油：稱取10g樣品，以250ml石油醚溶解，移入500ml分液漏斗中。
4.1.5 乳與乳制品: 稱取100g鮮乳(乳制品取樣量按鮮乳折算)，移入500ml分液漏斗中。
加100ml乙醇、1g草酸鉀，猛搖1min，加100ml乙醚，搖勻。加100ml石油醚，猛搖2min。
靜置10min，棄去下層。將有機(jī)溶劑層經(jīng)盛20g無水硫酸鈉的漏斗，小心緩慢地濾入250ml錐形瓶中,再用少量石油醚分?jǐn)?shù)次洗滌漏斗及其內(nèi)容物，洗液并入濾液中。以脂肪提取器或濃縮器蒸除有機(jī)溶劑,殘渣為黃色透明油狀物。再以石油醚溶解，移入150ml分液漏斗中，以石油醚稀釋至100ml。
4.1.6 蛋與蛋制品: 取鮮蛋10個,去殼，全部混勻。稱取10g(蛋制品取樣量按鮮蛋折算)置于250ml具塞錐形瓶中，加100ml丙酮，在電動振蕩器上振蕩30min，過濾。用丙酮洗殘渣數(shù)次,洗液并入濾液中用脂肪提取器或濃縮器將丙酮蒸除，在濃縮過程中,溶液變粘稠,常出現(xiàn)泡沫，應(yīng)小心注意不使其溢出。將殘渣用50ml石油醚移入分液漏斗中。振蕩,靜置分層。將下層殘渣放入另一分液漏斗中,加20ml石油醚,振搖,靜置分層, 棄去殘渣,合并石油醚，經(jīng)盛約15g無水硫酸鈉的漏斗濾入分液漏斗中，再用少量石油醚分?jǐn)?shù)次洗滌漏斗及其內(nèi)容物，洗液并入濾液中，以石油醚稀釋至100ml。
4.1.7 各種肉類及其他動物組織
4.1.7.1 甲法: 稱取紋碎混勻的20g樣品，置于乳缽中，加約80g無水硫酸鈉研磨，無水硫酸鈉用量以樣品研磨后呈干粉狀為宜。將研磨后的樣品和硫酸鈉一并移入250ml具塞錐形瓶中，加100ml石油醚，于電動振蕩器上振搖30min。抽濾，殘渣用約100ml石油醚分?jǐn)?shù)次洗滌, 洗液并入濾液中。將全部濾液用脂肪提取器或濃縮器蒸除石油醚，殘渣為油狀物。以石油醚溶解殘渣，移入150ml分液漏斗中，以石油醚稀釋至100ml。
4.1.7.2 乙法: 稱取絞碎混勻的20g樣品,置于燒杯中，加入40ml1:1過氯酸-冰乙酸混合液,上面覆蓋表面皿，于80℃的水浴上消化4～5h。將上述消化液移入500ml分液漏斗中，以40ml水洗燒杯,洗液并入分液漏斗。以30、20、20、20ml石油醚(或環(huán)己烷)分四次從消化液中提取農(nóng)藥。合并石油醚(或環(huán)己烷)并使之通過高約4～5cm的無水硫酸鈉小柱，濾入100ml容量瓶中, 以少量石油醚(或環(huán)己烷)洗小柱, 洗液并入容量瓶中, 然后稀釋至刻度，混勻。
4.2　凈化
4.2.1　于100ml樣品石油醚提取液(動、植物油樣品除外)中加10ml硫酸(提取液與硫酸體積比為10:1)。振搖數(shù)下后，將分液漏斗倒置，打開活塞放氣，然后振搖半分鐘，靜置分層。棄去下層溶液，上層溶液由分液漏斗上口倒至另一250ml分液漏斗中，用少許石油醚洗原分液漏斗后，并入250ml分液漏斗中，加100ml2％硫酸鈉溶液，振搖后靜置分層。棄去下層水溶液，用濾紙吸除分液漏斗頸內(nèi)外的水。然后將石油醚經(jīng)盛有約15g無水硫酸鈉的漏斗過濾，并以石油醚洗滌盛有無水硫酸鈉的漏斗數(shù)次。洗液并入濾液中，以石油醚稀釋至一定體積，供氣相色譜法用?；?qū)⑷咳芤簼饪s至1ml，進(jìn)行薄層色譜測定。經(jīng)上述凈化步驟處理過的樣液，如在測定時出現(xiàn)干擾，可再以硫酸處理。
4.2.2　于250ml動、植物油樣品石油醚提取液中，加25ml硫酸。振搖數(shù)下后，將分液漏斗倒置,打開活塞放氣,然后振搖半分鐘,靜置分層,棄去下層溶液。再加25ml硫酸,振搖30s,靜置分層，棄去下層溶液。上層溶液由分液漏斗上口倒于另一500ml分液漏斗中，用少許石油醚洗原分液漏斗，洗液并入分液漏斗中。加250ml2％硫酸鈉溶液，搖勻，靜置分層。以下按4.2.1“棄去下層水溶液”起依法操作。
4.3　色譜條件
4.3.1　氚源電子捕獲檢測器
4.3.1.1　氣化室溫度：190℃。
4.3.1.2　色譜柱溫度: 160℃。
4.3.1.3 檢測器溫度: 165℃。
4.3.1.4 載氣(氮?dú)?流速：60ml/ min。
4.3.1.5 極化電壓: 30V。
4.3.2　Ni63電子捕獲檢測器
4.3.2.1　氣化室溫度：215℃。
4.3.2.2　色譜柱溫度：195℃。
4.3.2.3　檢測器溫度：225℃。
4.3.2.4　載氣(氮?dú)?流速：90ml/min。
4.3.3　色譜柱：內(nèi)徑3～4mm，長1.2～2m的玻璃柱，內(nèi)裝涂以1.5％OV—17和2％QF—1的混合固定液的80～100目硅藻土。
4.3.4 測量與計算
　電子捕獲檢測器的線性范圍狹窄，為了便于定量，選擇樣品進(jìn)樣量使之適合各組分的線性范圍。根據(jù)樣品中六六六、滴滴涕存在形式，相應(yīng)地制備各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計算樣品中的含量。
　　六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物含量按式(1)計算。
A1×1000
X1 = ─────────── ................(1)
m1 × V2/V1 × 1000
式中:X1——樣品中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量,mg/kg;
　　 A1——被測定用樣液中六六六或滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量，ng;
　　 V1——樣品凈化液體積，ml；
　　 V2——樣液進(jìn)樣體積，μl;
m1——樣品質(zhì)量，g。